油脂中磷脂測定法（GB5537—85）
油脂中磷脂即由甘油
、脂肪酸、磷酸和氨基醇等所組成的復雜化合物
。
（一）鉬藍比色法
1．儀器和用具
瓷坩堝或石英坩堝；分光光度計或帶塞的50ml比色管
；移液管：5
、10ml；電爐
、高溫爐；溶量瓶：100
、500
、1000ml；表面皿
、燒杯
、量筒；恒溫水浴鍋
；漏斗
、坩堝鉗、試劑瓶等
。
2
、試劑
50%氫氧化鉀溶液；鹽酸
、硫酸
、氧化鋅、濾紙
；0.015%硫酸聯氨溶液
；
2.5%鉬酸鈉稀硫酸溶液：量取140ml硫酸注入300ml水中 ，搖勻
，冷卻至室溫
，加入12.5g鉬酸鈉，溶解后加入水至500ml
，搖勻
，靜置24h備用。
磷標準溶液：稱取無水的磷酸二氫鉀0.4391g溶于1000ml水中
，作為1號液
，含磷0.1mg/ml,吸取1號液10ml，加水稀釋至100ml,含磷0.01mg/ml,作為2號液
，比色用
。
3．操作方法
（1）繪制標準曲線：取5只50ml比色管，編成1
，2
，4
，6，8五個號碼
，按號碼順序分別注入磷標準2號液1
，2，4
，6
，8ml，再按順序分別加水 9
、8
、6、4
、2ml
。 接著向5只管內各加0.015%硫酸聯氨溶液8.0ml；各加鉬酸鈉稀硫酸溶液2.0ml
，加塞
、搖勻。去塞
，將5只管置于正在沸騰的水浴中加熱 10min
，取出冷卻至室溫，用水稀釋至50ml
，充分搖勻
，經10min后，用分光光度計在波長650nm下
，用3cm液槽
，用水調整零點，分別測定消 化值
。以消化值為縱坐標
，以磷量（0.01、0.02
、0.04
、0.06、0.08mg）為橫坐標繪制標準曲線
。
（2）制備被測液：用坩堝稱取試樣約10g(準確至0.001g),加氧化鋅0.5g,先在電爐上加熱炭化
，然后送入550～600℃的高溫爐中灼燒至灰 化（白色），灼燒時間約2h,取出坩堝冷卻至室溫
，用熱鹽酸（1：1）10ml溶結灰分
，并加熱微沸5min，將溶解液過濾注入100ml容量瓶中，用熱 水沖洗坩堝和濾紙
，待濾液冷卻至室溫后
，用50%氫氧化鉀溶液中和至出現混濁，緩慢滴加鹽酸使氧化鋅沉淀全部溶解后
，再滴2滴
，后用水稀釋至刻度，搖 勻
。
（3）比色：用移液管吸取被測液10ml注入50ml比色管中
，加入0.015%硫酸聯氨8.0ml，加2.0ml鉬酸鈉稀硫酸溶液
、加塞
，將比色管置于 正在沸騰的水浴中加熱10min，取出冷卻至室溫
，用水稀釋至50ml，充分搖勻
，經10min后
，用分光光度計在波長650nm下，用3cm液槽
，用水 調整零點
，測定消光值。
4.結果計算
根據被測液的消光值
，從標準曲線查得磷量（P）,按公式3—33計算磷脂含量：
磷脂（%）=p×V2 / V1 ×26.31×100 / W×1000 (3—33)
式中：P—標準曲線差得的磷量
，mg; v2—樣品灰化后稀釋的體積，ml
；
V1—比色時所取的被測液體積
，ml；26.31—每毫克磷相當于磷脂的毫克數
；W—試樣重量
，g。
雙試驗結果允許差不超過0.04%
，求其平均數
，即為測定結果。測定結果取小數點后二位
。
（二） 重量法
1.儀器和用具
玻璃漏斗
、漏斗架；燒杯：100ml; 錐形平
、濾紙等
。
2.試劑
丙酮
3.操作方法
取混勻的樣品約100ml,加熱約90℃時進行過濾。用燒杯稱取試樣25g，加熱至80℃
，加水2～2.5ml
，充分攪拌使之水化，在室溫下靜置過夜
，或 進行離心沉淀
，傾出上層清液，用已知恒重的濾紙（或用抽裝置抽濾）進行過濾
，待濾液全部濾出后
，用冷的丙酮把杯內殘留的沉淀沖洗入濾紙中，繼續(xù)用水調整零 點
，測定消光值
。
4.結果計算
重量法測定磷脂含量按公式3—34計算：
磷脂（%）=W1 / W ×100 式中：W1—沉淀物重，g
；W—試樣重量
，g。
雙試驗結果允許差不超過0.04%
，求其平均數
，即為測定結果。測定結果取小數點后二位
。
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